《表1 qRT-PCR验证所选基因及对应引物信息》

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《利用iTRAQ技术和转录组筛选芍药属远缘杂交不亲和基因》

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使用TRIzol法对各样品进行总RNA提取，用ReverTra Ace qPCR RT Kit反转录试剂盒（东洋纺生物科技有限公司）进行c DNA的合成。以c DNA为模板，选择β-Tubulin作为内参基因[18]，检测引物为F:5′-TGAGCACCAAAGAAGTGGACGAAC-3′和R:5′-CACACGCCTGAACATCTCCTGAA-3′。使用SYBR Premix Ex TaqTM kit试剂盒（宝日医生物技术有限公司）在ABI PRISM 7900HT Real-Time PCR System（美国应用生物系统中国公司）上进行qPCR检测，每个样品进行3次技术重复。20μL反应体系包括10μL SYBR?Premix，1μL cDNA，正、反引物各取0.5μL，ddH2O 8μL。两步法进行扩增，反应程序：预变性95℃，60 s；95℃变性15 s，60℃退火30 s，共40个循环。反应结束后进行溶解曲线分析，按照2-△△CT法计算出基因的相对表达量。引物设计采用Primer 5，基因及检测引物等相关信息详见表1。