《表1 目的基因引物及qRT-PCR反应条件参数》

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《小檗碱和miRNA-18b对猪IVF胚胎HIF-1α的调控作用》

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分别将各组别收集的4-细胞、8-细胞、桑椹胚期的胚胎（各时期每组100枚）于1.5mL离心管中，按照RNA提取试剂盒（CWbio.Co.Ltd）说明提取总RNA，按照PCR试剂盒（CWbio.Co.Ltd）操作说明进行反转录和Real-time PCR。取12μL RNA样本，依次加入5×Buffer 4μL，10×Reverse Transcriptase Mix 2μL，制备20μL反转录反应体系，混合均匀，37℃孵育60min，95℃孵育5min，反转录产物于-20℃保存。反应在STRATA GENE荧光实时定量分析系统中按照miScript PCR Starter Kit试剂盒（CWbio.Co.Ltd）操作说明进行。GAPDH为HIF-1α的内参基因。PCR反应条件为：95℃预变性2min；95℃变性15s，退火20s，72℃延伸30s，共45个循环。采用2-△△CT法进行基因的相对定量。试验重复3次。