《表1 qRT-PCR目的基因引物序列Tab.1 Primer sequence for qRT-PCR》

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分别取上述3组细胞株,分别以2×105个/孔的密度接种于6孔板中。置于37℃、含5%CO2条件下培养,待3组细胞贴壁长满80%~90%,按照RNA提取试剂盒说明书提取细胞总RNA,最终反转录合成cDNA。按SuperReal荧光定量预混试剂彩色版(SYBRGreen)试剂盒说明书操作。将上一步得到的cDNA,以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)为内参照,与SYBR?Premix Ex TaqTM试剂盒各组分配制Mix反应,最终进行qRT-PCR反应。反应条件为:95℃预变性30s,1个循环;随后95℃变性5s,60℃退火20s,72℃延伸10s,并进行40个循环;最后95℃延伸1min。各引物序列见表1。