《表1 质粒构建引物序列Tab.1 Primer sequences for plasmids construction》

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《Uhrf1与Dppa3相互作用调节印记基因的表达》

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Restriction sites were underlined；the Flag tag sequences were bold

为了构建Uhrf1过表达载体p CMV-Myc-Uhrf1和Dppa3过表达载体p CDH-Flag-Dppa3，以J1小鼠胚胎干细胞为材料，Trizol法提取总RNA，经反转录获得J1细胞的c DNA。以上述c DNA为模板，Uhrf1-Eco R1-F和Uhrf1-Xhol-R，Flag-Dppa3-Nhe1-F和Dppa3-Not I-R分别为扩增引物（引物序列见表1），PCR扩增法获得Uhrf1和Dppa3的表达序列，酶切后分别与p CMV-myc和p CDH-CMV-MCS-EF1-Puro载体连接。将连接产物经热激转化入DH5α菌体中，小提测序鉴定正确后用去内毒质粒提取试剂盒提取Uhrf1和Dppa3的体外过表达载体p CMV-MycUhrf1和p CDH-Flag-Dppa3用于细胞转染。