《表1 构建sg RNA的核苷酸序列Tab 1 The nucleotide sequence for constructing sg RNA》

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《利用CRISPR/Cas9慢病毒系统构建肺部EZH2基因敲除小鼠》

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根据实验需要设计两个sg RNA（sg EZH2-1，sg EZH2-2），其所在位置分别在EZH2的第3和第4个外显子上（图1），与Bsm B1酶切后形成的黏性末端互补，3’端添加C。设计两对EZH2的CR ISPR寡核苷酸链同时，设计一个对照sg R NA-l ac Z。表1为根据实验需要设计的sg R N A寡核苷酸序列o l i g o1和o l i g o2，分别在基因的E x o n 3和E x o n 4上，同时包括对照寡核苷酸序列sg R NA-lac Z-oligo。并根据靶位点设计相应的扩增引物，分别是sg R NA-Ezh2-F1:5’-ACTTCTGGTGAGTCACTAGATT-3’和sg R NA-Ezh2-R1:5’-AG G G AG G A A AG C A AC TGTG A AT-3’，P C R产物长度是510 bp，切割后产物大小是190 bp、320 bp。sg RNA-Ezh2-F2:5’-CCAGAGTTACAGCATCTGTTCA-3’和sg R NA-Ezh2-R2:5’-TGA A ACACATAGGTGGCCATCA-3’，PCR产物长度是540 bp，切割后产物大小是160 bp、380 bp。