《表1 q PCR引物序列Tab 1 Primer sequence for q PCR》

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《SOCS1、SHP1在JAK2V617F突变阳性骨髓增殖性肿瘤中的表达及鲁索替尼的调控作用》

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JAK2:Janus kinase 2；SOCS1:Suppressor of cytokine signaling 1；SHP1:SH2-containing protein tyrosine phosphatase 1；F:Forward；R:Reverse

收集细胞提取总RNA，检测RNA纯度，合格后反转录合成c DNA。以c DNA为模板、以β-actin为内参基因进行q PCR反应，反应体系共25μL，反应条件:50℃2 min，95℃10 min，1个循环；95℃15 s，60℃1 min，40个循环。q PCR反应前3~15个循环的荧光信号作为荧光本底信号，调节基线至适宜处作为阈值，各荧光曲线与基线交叉点的循环数即为Ct值。根据公式ΔCt=Ct（目的基因）-Ct（内参基因）和ΔΔCt=2-ΔCt，计算各目的基因的相对表达量，各组实验重复3次，取平均值。JAK2V617F MGB荧光探针上游引物5′-FAM-TCA CAA GCA TTT GGT TTT-MGB-3′，JAK2V617F下游引物:5′-CCA GAA TAT TCTCGT CTC CAC TGA A-3′。根据标准品计算JAK2和JAK2V617F的绝对拷贝数量，计算JAK2V617F/JAK2比值。全序列引物设计见表1。