《表2 HPGD基因PCR引物序列及PCR条件Table 2 Primer sequences of PCR for HPGD》

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《HPGD突变导致罕见的以杵状指趾为主要表现的原发性肥厚性骨关节病家系研究》

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采集先证者、妹妹及其父母外周静脉血，提取基因组DNA（采用德国QIAamp DNA Blood Mini试剂盒）。采用Primer 3软件设计引物，扩增HPGD的1~7外显子及其与内含子交界区。引物序列、扩增长度及PCR反应条件见表2。PCR扩扩增产物纯化后用荧光自动测序仪（ABI3700，美国）直接测序，测序结果与参考序列NM_000860.5比对，以确定HPGD突变位点及类型，并进一步与NCBI SNP、人类基因突变数据库（http://www.hgmd.cf.ac.uk/ac/index.php）进行比对，排除变异位点为基因多态性位点，并确定其是否为未报道过的新突变位点。采用Bio Edit（7.0.9.1）软件分析突变位点在不同物种中的保守性，采用NNSPLICE0.9（http://www.fruitfly.org/）和Net Gene2 Server（http://www.cbs.dtu.dk/services/Net Gene2/）软件对剪切位点突变进行致病性预测。