《表1 溆浦鹅ADSL基因的分子克隆及qRT-PCR引物信息》

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《溆浦鹅ADSL基因的克隆及其结构与表达分析》

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根据绿头鸭（A.platyrhynchos）（NM＿001310389.1） 和浙东白鹅（XM＿013181071）ADSL序列设计溆浦鹅ADSL基因引物ADSL-1。PCR反应体系为:PCR MIX 12μL，模板cDNA（200 ng/μL）1μL，上、下游引物（10μmol/L）各0.8μL，加ddH2O至20μL。反应条件为:95℃预变性5 min；95℃30 s，50.2℃30 s，72℃1 min为1个循环，34个循环；72℃延伸5 min；最后4℃保温10 min。扩增结束后利用1%琼脂糖凝胶电泳检测，切胶回收，送湖南擎科生物技术有限公司测序。再根据ADSL基因第一链合成序列设计5'RACE和3'RACE的特异性引物（表1），5'RACE和3'RACE体系和反应条件参照相关试剂盒说明。目的片段纯化后连入p-ToPo质粒载体中，转入DH5α感受态细胞后，涂布在含Amp的LB培养基上培养12～15 h，挑选阳性克隆菌落提取质粒，用1%琼脂糖凝胶电泳检测后送公司测序。