《表1 引物序列信息:精胺对鹅免疫器官指数及免疫相关因子基因表达的影响》

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《精胺对鹅免疫器官指数及免疫相关因子基因表达的影响》


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TNF-α:肿瘤坏死因子α;IL-1β:白细胞介素-1β;IL-6:白细胞介素-6;GAPDH:甘油醛-3-磷酸脱氢酶;IFN-γ:γ-干扰素。

实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)体系:i TaqTM通用型SYBR Green超预混液(Bio-Rad Laboratories,CA,USA)5μL,上游和下游引物各0.2μL,cDNA模板0.5μL,无RNA酶水4.1μL,共10μL。反应条件:95℃预变性3 min;95℃变性10 s,根据引物退火温度(表1)分别退火30 s,72℃延伸30 s并采集荧光,共45个循环。绘制熔解曲线。以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)作为内参基因,采用2-ΔΔCT方法计算目的基因的相对表达量,每个样品设3个重复。