《表1 引物序列：长爪沙鼠NAFLD模型中CIP4基因的表达及与β-catenin蛋白相互作用的免疫共沉淀验证》

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《长爪沙鼠NAFLD模型中CIP4基因的表达及与β-catenin蛋白相互作用的免疫共沉淀验证》

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采用qPCR法。二步法提取总RNA，然后DNase I消化去基因组DNA，反转录合成第一链，反转录反应采用杭州宝赛公司的反转录试剂盒（RT02020）。提取总RNA的组分包括DNase I 2μl，Buffer 2μl，RNA 18μl，37℃反应10min，加入2μl终止Buffer，70℃10min灭活DNase I；反转录组分包括：M-MLV 1μl，5×RT Buffer 4μl，RNase A抑制剂1μl，OligdT（18）1μl，dNTP 1μl，RNA 1μg，Rnase-free H2O补至20μl，42℃45min，70℃10min灭活M-MLV。mRNA引物设计与合成由上海捷瑞生物工程有限公司完成，以GAPDH为内参对照，引物序列见表1。qPCR反应体系如下：20μl体系里含有2×荧光定量PCR Mix 10μl，上游引物（10μM)1μl，下游引物（10μM)1μl，模板DNA 1μl，双蒸水7μl。反应程序如下：94℃模板预变性1min，94℃模板变性10s，58℃引物退火10s，72℃PCR延伸10s，共40个循环。采用2-ΔΔCt法计算基因表达水平。