《表1 引物序列：氟苯尼考对肉鸡空肠黏膜的完整性及免疫相关基因表达的影响》

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《氟苯尼考对肉鸡空肠黏膜的完整性及免疫相关基因表达的影响》

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用NAiso Plus Total RNA试剂，经Trizol法提取空肠组织总RNA，核酸蛋白测定仪ND-100测定总RNA的浓度，1%琼脂糖凝胶法检测总RNA的完整性。根据NCBI中GeneBank公布的Gallus的TLR4、MyD88、NF-κB、TNF-α及内参β-actin的核苷酸序列，由TaKaRa公司设计并合成，详情见表1。参照引物说明书，将其浓度调整为10μM。Real-time PCR采用SYBR?PremixTMⅡ，反应体系为SYBR 12.5μL，Primer Forward（10μmol·L-1）1μL，Primer Reverse（10μmol·L-1）1μL，ddH2O 8.5μL，c DNA 2μL，扩增条件为95℃预变性30 s；95℃变性5 s，退火（温度见表1），循环40次；72℃延伸30 s。基因相对表达量结果分析采用2-ΔΔCT法。