《表2 ScCTR1基因克隆和qRT-PCR的引物》

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《甘蔗乙烯信号转导途径关键基因CTR1的克隆与表达分析》

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从NCBI上下载高粱SbCTR1（XM＿002447031.2）、玉米ZmCTR1（EU973342.1）的基因序列，利用DNA-MAN进行序列比对，在ORF框的外侧，选取保守性较高的序列区域利用Primer Premier 5.0设计一对特异性引物F1和R1（表2），进行甘蔗CTR1基因的克隆。以GT28幼嫩叶片cDNA为模板，PCR扩增体系为50μL，包含1μL PrimeSTAR GXL DNA Polymerase（1.25 U/μL；TaKaRa，大连）、10μL 5×PrimeS-TAR GXL Buffer、4μL dNTP Mixture（2.5 mmol/L）、1μL上下游引物（10μmol/L）、2μL cDNA模板（500 ng/μL）和31μL无菌水。PCR扩增程序为：98℃10 s，56℃15 s，68℃2.3 min，34个循环。PCR产物利用DNA胶回收试剂盒（天根，北京）进行回收和纯化，克隆到pMD19-T载体上，热激法导入大肠杆菌DH5α中，抗性平板筛选阳性单菌落进行测序。