《表1 病毒RT-PCR检测引物Tab.1 Primers for RT-PCR virus detection》

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《番茄斑驳花叶病毒海南分离物全基因组序列分析》

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分别合成（上海生工生物工程有限公司）番茄斑驳花叶病毒（ToMMV）[10]、烟草花叶病毒（TMV）[12]和番茄花叶病毒（ToMV）[13]的特异性引物（表1），采用RT-PCR检测对小RNA测序结果进行验证。采用Trizol试剂（南京诺唯赞生物科技有限公司）提取番茄（圣女果）感病植株幼嫩叶片的总RNA，以其为模板利用一步法反转录试剂盒HScript?One Step RT-PCR Kit Ver.5.1（南京诺唯赞生物科技有限公司）进行RT-PCR扩增。反应体系为:5.0μL 2×One Step Mix，2.5μL RNase free ddH2O，0.5μL CPF（10μmol/L），0.5μL CPR（10μmol/L），1.0μL模板RNA，0.5μL One Step Enzyme Mix，加ddH2O至总反应体积20μL。RT-PCR反应条件为:50℃反转录30 min，94℃预变性3 min；94℃变性30 s，55℃退火30 s，72℃延伸1 min，35个循环。对5株田间样品进行检测，根据扩增产物的大小和产物直接测序结果鉴定样品中的病毒种类。