《表1 RT-PCR引物的基因序列Tab.1 Primers used for RT-PCR assays》

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《IL-17联合IFN-γ体外诱导RAW264.7细胞增殖和凋亡的影响》


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取6孔板,按照2×105/孔的密度接种RAW264.7细胞,培养5 d后,各孔加入l m L Trizol,提取总RNA。紫外分光光度仪检测A260/A280比值,分析RNA纯度和浓度。合成cDNA,进行RT-PCR取1μL cDNA,SYBR Green Master mix 5μL,上下游引物各0.4μL,补水至20μL。反应条件为95℃5 min预热;95℃15 s变性,60℃1 min退火延伸,40循环;4℃30min保持,分别进行扩增,每个样本重复3次。所用引物根据GeneBank发布的序列设计并合成(表1)。逆转录体系、PCR扩增体系及反应条件同试剂盒说明书。实验重复3次。相对表达量采用2-ΔΔCt法计算。