《表1 克隆及qRT-PCR引物》

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《药用菊花中绿原酸合成途径关键酶基因的克隆及表达分析》

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从本课题组所得到的杭菊转录组数据库中筛选得到基因序列，使用Primer 5从序列ORF区2端设计引物（表1）采用qRT-PCR方法从杭菊中克隆这2个基因的全长开放读码框。以克隆用的cDNA为模板，使用PrimeSTAR?GXL DNA Polymerase进行PCR扩增，20μL的反应体系中5×PrimeSTAR GXL Buffer 4μL，dNTP Mixture（2.5 mmol/L）1.6μL，正、反引物（10 mmol/L）各1μL，cDNA模板1μL，PrimeSTAR?GXL DNA Polymerase 0.4μL，灭菌蒸馏水11μL。反应程序为98℃、10 s，60℃、15 s，68℃、90 s，35个循环，68℃充分延伸5 min。