《表1 用于基因克隆和qRT-PCR的引物》

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《雷公藤4个环氧角鲨烯环化酶基因克隆与表达分析》

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TwOSC:雷公藤环氧角鲨烯环化酶；EF1α:延长因子1α；下同TwOSC:Tripterygium wilfordii oxidosqualene cyclase；EF1α:Elongation factor 1α；The same below

根据NCBI中其他物种中已知功能的OSC基因，对本实验室已建立的雷公藤转录组数据库信息进行检索，共筛选出4条OSC基因序列。以雷公藤根组织总RNA反转录得到的cDNA为模板，利用PrimeSTAR HS（Premix）高保真酶对目的基因进行扩增。反应体系:cDNA 1μL、100μmol/L上下游引物各1μL（引物序列见表1）、PrimeSTAR 12.5μL，ddH2O 9.5μL。反应程序:95℃3 min；98℃10 s，55℃5 s，72℃2 min 10 s，34个循环；72℃10min。PCR反应结束后，利用Ex Taq进行加A反应，然后将PCR产物进行切胶回收。回收产物与pMD19-T克隆载体连接，获得重组质粒并由北京奥科生物技术有限公司测序。