《表1 RACE引物信息：太平洋真宽水蚤CYP4C和CYP44基因克隆及分子特征分析》

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《太平洋真宽水蚤CYP4C和CYP44基因克隆及分子特征分析》

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依据SMARTer RACE 5’/3’Kit（Takara，Japan）说明书将RNA反转录合成5’/3’RACE-Ready cD-NA，-20℃保存。将测序获得的CYP4C和CYP44基因中间序列通过NCBI数据库比对，根据其正确的中间序列设计5’-RACE和3’-RACE反应需要的特异性引物（表1）。分别利用5’-RACE和3’-RACE反应特异性引物和10×Universal primer A Mix（UPM）（表1）扩增CYP4C和CYP44基因的5’末端和3’末端，RACE扩增产物利用NuceloSpin Gel and PCR Clean-Up kit进行琼脂糖凝胶回收，将胶回收产物与pRACE载体连接，50℃孵育15 min。取2.5μL连接产物克隆至Stellar感受态细胞中，通过蓝白斑筛选获得阳性克隆子并测序。