《表1 克隆油茶花青素还原酶基因的相关引物》

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《油茶花青素还原酶基因克隆和体外功能研究》

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注:NUP和UPM是RACE通用引物，小写字母表示的碱基是p MAL-c5X载体部分序列，小写字母加下划线表示的碱基是内切酶序列，大写字母表示的碱基是ANR1和ANR2基因ORF框上的序列。

基于已发表的茶树花青素还原酶基因（Cs ANR1和Cs ANR2，Gen Bank登录号为ADZ58166和ADZ58168）[8]和本实验室前期获得的油茶转录组序列[7]的比对分析，鉴定了两条同源的油茶花青素还原酶基因（Co ANR1和Co ANR2）的转录本。基于这两条转录本，进一步采用RACE结合嵌套PCR方法获得Co ANR1和Co ANR2的5’-UTR和3’-UTR序列，测序验证后的片段通过Meg Align软件比对，再用Edit Seq软件拼接获得全长序列。以ORF系列引物（Co ANR1-ORF-F，Co ANR1-ORF-R和Co ANR2-ORF-F，Co ANR2-ORF-R）扩增Co ANR1和Co ANR2完整的ORF框。相关引物见表1。