《表1 实时荧光定量PCR引物对》

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《TGF-β1/ILK/FSP1信号通路在环孢素诱导肾小管上皮细胞转分化中的作用》

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依据RNAiso Reagent说明书提取制备总RNA，Nano-Drop 1000测定RNA的纯度及浓度。按照TaKaRa逆转录试剂盒说明书逆转录cD-NA，反应体系为:5×Prime Script buffer 2μL，Prime Script RT Enzyme Mix 10.5μL，o1igo dT primer 0.5μL，random 6-mers 0.5μL，total RNA 6.5μL。37℃逆转录15 min，85℃灭活逆转录酶5 s，模板cDNA 4℃保存。实时荧光定量PCR引物见表1。总反应体系12μL，包括:SYBR Master Mix（2×）5μL、上游引物1.5μL、下游引物1.5μL、模板cDNA lμL和nuclease free water 3μL。Taq酶活化95℃2 min，变性、退火和延伸分别为95℃15 s、60℃15 s和72℃1 min，40个循环。60℃～95℃检测溶解曲线。以Ct值为统计参数，按2-△△Ct法计算TGF-β1、ILK和FSP1mRNA的相对表达量。