《表1 实时荧光定量PCR引物》

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《成年滩羊和小尾寒羊皮肤毛囊差异表达miRNA的筛选》

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为验证测序结果的可靠性，对鉴定出的miRNA进行实时荧光定量PCR检测验证。以总RNA为初始模板，随机选取4个miRNAs，miRNAs反转录引物为通用颈环序列（GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGAC）和目标miRNA 3'末端6个碱基的反向互补序列构成。使用Revert Aid First Strand cDNASynthesis Kit试剂盒（Thermo Fisher Scientific，美国）按照产品说明书进行cDNA第一链合成，使用SYBR?Premix Ex Taq试剂盒（TaKaRa，大连）进行qRT-PCR验证，以U6为内参基因。miRNA相对表达量采用2-△△Ct法进行计算。miRNA荧光定量PCR引物见表1。所有引物由生工生物工程（上海）有限公司合成。