《表1 实时荧光定量PCR引物》
利用RT-qPCR分析相同药物处理浓度下不同时间点的关键基因的差异表达倍数,这些基因与细胞周期、细胞自噬、cAMP信号通路、AMPK信号通路和mTOR信号通路有关。所有基因的引物使用Primer Premier 5(Premier Biosoft,美国)设计,引物序列的详细信息见表1。将P36和P60的RNA逆转录成cDNA,以cDNA为模板进行实时荧光定量PCR,扩增体系为:2×AceQ qPCR SYBR Green Master Mix(诺唯赞生物科技有限公司,中国)10μL、上游引物4μL(2 mmol·L-1)、下游引物4μL(2 mmol·L-1)、cDNA模板2μL。每个反应设置3个平行样品,所有反应均在CFX96实时荧光定量PCR仪(Bio-Rad,美国)上进行,反应条件为95℃5 min;95℃10 s,60℃30 s,39个循环;熔解曲线分析程序为从65℃逐渐升温至95℃,每升高0.5℃保持5 s。以甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因(GAPDH)为内参基因。所有数据均一化后进行比较分析。
图表编号 | XD0083607000 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2019.06.15 |
作者 | 柴小翠、杨文涛、汤琪、马雪凤、熊杰、王平、缪炜 |
绘制单位 | 中国科学院水生生物研究所水生生物多样性与保护重点实验室、中国科学院大学、中国科学院水生生物研究所水生生物多样性与保护重点实验室、中国科学院大学、湖北中医药大学老年医学研究所、中国科学院水生生物研究所水生生物多样性与保护重点实验室、中国科学院大学、中国科学院水生生物研究所水生生物多样性与保护重点实验室、湖北中医药大学老年医学研究所、中国科学院水生生物研究所水生生物多样性与保护重点实验室 |
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