《表1 实时荧光定量PCR引物》

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《采用实时荧光定量PCR法分析小熊猫胃肠道菌群》

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使用CFX96荧光定量PCR仪分析小熊猫胃肠道的13种菌群，引物见表1。对所有引物的特异性及熔解温度（Tm值）进行检测。PCR反应体系包括1μL样品DNA、1μL上游引物、1μL下游引物、12.5μL SYBR Premix Ex Taq TM II和9.5μL ddH2O，并设置阴性对照。PCR反应程序:95°C预变性5 min；95°C变性15 s，55~95°C退火30 s，72°C延伸30 s，40个循环；所有PCR循环结束后72°C延伸5 min。最后在上述PCR反应体系和程序条件下，用确定的Tm值建立标准曲线，并对样品进行实时荧光定量检测。每个样品做3个重复。根据对应的Ct值及标准曲线计算胃肠道样品细菌DNA的拷贝数[12]。菌群丰度以每克内容物中细菌DNA拷贝数的对数值表示。