《表1 实时荧光定量PCR引物》

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《竹节参处理下嗜热四膜虫基因表达变化分析》

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利用RT-qPCR分析相同药物处理浓度下不同时间点的关键基因的差异表达倍数，这些基因与细胞周期、细胞自噬、cAMP信号通路、AMPK信号通路和mTOR信号通路有关。所有基因的引物使用Primer Premier 5（Premier Biosoft，美国）设计，引物序列的详细信息见表1。将P36和P60的RNA逆转录成cDNA，以cDNA为模板进行实时荧光定量PCR，扩增体系为:2×AceQ qPCR SYBR Green Master Mix（诺唯赞生物科技有限公司，中国）10μL、上游引物4μL（2 mmol·L-1）、下游引物4μL（2 mmol·L-1）、cDNA模板2μL。每个反应设置3个平行样品，所有反应均在CFX96实时荧光定量PCR仪（Bio-Rad，美国）上进行，反应条件为95℃5 min；95℃10 s，60℃30 s，39个循环；熔解曲线分析程序为从65℃逐渐升温至95℃，每升高0.5℃保持5 s。以甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因（GAPDH）为内参基因。所有数据均一化后进行比较分析。