《表2 CRISPR/Cas9敲除结果Table 2 Result of CRISPR/Cas9 knock out》

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《甘蓝型油菜BnaSDG8基因CRISPR/Cas9敲除载体的构建及功能探究》

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提取成功转化植株的DNA，用Cas9–A和Cas9–C检测引物扩增，再转入p EASY载体中，测序结果如图8所示。在19株材料中共获得4株在靶位点附近发生编辑的转化植株；比对4株转化材料与野生型材料的测序结果（表2），发现Bna SDG8–A基因靶位点上存在2种编辑情况，即连续3个碱基（AGC）缺失或者1个碱基（T）插入；而在Bna SDG8–C基因靶位点上只存在一种编辑情况，即同时出现缺失2个碱基（TC，AG）和4个碱基（C、AGC）。从编辑类型来看，在同一植株中Bna SDG8–A均只有单一情况编辑，即只存在敲除3个碱基或插入1个碱基；而Bna SDG8–C则存在2种不同的敲除情况，即同时敲除4个碱基和2个碱基。从编辑的位置上看，Bna SDG8–A和Bna SDG8–C编辑均发生在靶序列后10 nt的位置上，靠近PAM位点，且敲除碱基数量较少，未发现大于5 bp碱基敲除的情况。4株材料中有11条基因发生被敲除的情况，1株材料中的Bna SDG8–A为插入1个碱基T。