《表1 游离巯基含量测定结果》

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《β-乳球蛋白聚乙二醇定点修饰物的制备及其抗原性变化》

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注：不同字母表示差异显著（P<0.05）。

实验中所用m PEG-MAL是一种巯基特异性PEG衍生物。m PEG-MAL与Cys121游离巯基的特异性结合结果验证可以体现在两方面：首先，对修饰产物进行电泳鉴定发现所得产物为仅有一单一条带的单修饰产物。若PEG结合在非Cys121的任何巯基，说明蛋白内部二硫键打开，存在多个游离巯基，则2.1.1节中在m PEG-MAL加入过量情况下，修饰产物的SDS-PAGE不应为单一条带，而是出现多修饰条带，电泳鉴定发现所得产物仅有一单一条带说明本实验中蛋白内部二硫键保持完好。再者，在蛋白内部二硫键保持完好的情况下，β-LG游离巯基含量即β-LG唯一游离巯基Cys121游离巯基的含量。对分离纯化后产物进行游离巯基含量测定显示，经PEG修饰后β-LG游离巯基含量由52.3?μmol/g降为0.3?μmol/g(P<0.05）（表1），说明修饰产物中Cys121游离巯基含量几乎降为零，游离巯基已与m PEG-MAL发生共价结合，因此未被检测到。综上，可验证Cys121游离巯基已与m PEG-MAL发生特异性结合。