《表3 靶点检测引物:大豆生物钟基因GmLNK1/2、GmRVE4/8和GmTOC1 CRISPR/Cas9组织表达分析及敲除靶点的鉴定》

《表3 靶点检测引物:大豆生物钟基因GmLNK1/2、GmRVE4/8和GmTOC1 CRISPR/Cas9组织表达分析及敲除靶点的鉴定》   提示:宽带有限、当前游客访问压缩模式
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《大豆生物钟基因GmLNK1/2、GmRVE4/8和GmTOC1 CRISPR/Cas9组织表达分析及敲除靶点的鉴定》


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大豆生物钟基因靶点编辑有效性检测步骤如下:(1)用1.6中收集的大豆根毛提取DNA。(2)利用CRISPR/Cas9载体通用引物SP1和SP3(表3)检测大豆根毛是否为转基因根毛(目的片段的长度约为2000 bp左右),检测每个载体20个转基因事件以检测靶点编辑效率。(3)根据每个基因的DNA序列,分别设计扩增目的基因的靶点检测特异引物。利用每个基因的靶点特异引物(表3)进行PCR扩增目的片段,将PCR产物送广州天一辉远测序服务公司测序。(4)分析测序结果的峰图,如果在靶点附近发生套峰,证明目的基因的靶点是有效的。