《表1 引物序列及用途：蝴蝶兰PhNAC1基因序列分析及对低温胁迫的响应》

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《蝴蝶兰PhNAC1基因序列分析及对低温胁迫的响应》

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利用DNAMAN和Primer 5.0软件，以GenBank中已登录的JF831198（铁皮石斛，Dendrobium candidum）、KC954544（铁皮石斛，Dendrobium officinale）和AB257312（蕙兰，Cymbidium hybrid）为模板，设计1对简并引物PhNAC1-F和PhNAC1-R（表1），用于扩增蝴蝶兰NAC基因中间保守片段。将得到的中间保守序列经BLAST比对正确后，分别设计1对5'端特异引物（GSP5-1、GSP5-2）和3'端特异引物（GSP3-1、GSP3-2）。对中间保守区片段、5'-RACE扩增片段和3'-RACE扩增片段进行分析比对并拼接，通过BLAST对得到的基因全长进行同源性比对，确定得到的基因为NAC基因。在ORF区两端设计特异引物ORF-F和ORF-R对ORF序列进行验证。