《表1 荧光定量PCR引物列表》

  提示：宽带有限、当前游客访问压缩模式

本系列图表出处文件名：随高清版一同展现

《Nanog、Oct-4、Sox-2基因在3种间充质干细胞中的表达》

1. 获取 高清版本忘记账户？点击这里登录

1. 下载图表忘记账户？点击这里登录

利用Primer premier 5.0软件设计Sox-2、Oct-4和Nanog 3个基因的引物序列（表1）。在细胞长至约80%融合度时，使用胰蛋白酶消化并收集细胞。Trizol法提取总RNA，并通过反转录合成cDNA后进行PCR扩增。扩增片段回收并纯化，克隆至pGM-T载体上，冰上放置30 min，加入至50μL DH5a感受态细胞中，冰中放置30 min，42℃水浴90 s后，再在冰中放置2～3 min，不要摇动离心管。加入950μL不含Amp的液体LB培养基，恒温培养箱37℃，200 r/min培养1 h。培养完后在添加了100μg/mL的Amp、20 mg/L的X-Gal、100 mmol/L的IPTG的固体LB培养基上均匀涂布100μL液体培养基，37℃下倒置培养14～16 h，用灭菌接种针尖端挑取白色单菌落，接种于含3 mL LB含Amp的液体培养基的玻璃试管里，37℃、200 r/min、摇床培养16～20 h。保存菌种后，对质粒进行提取，并对质粒标准品进行测序鉴定。