《表1 荧光定量引物基因列表》

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《基于全转录组测序的绵羊胚胎不同发育阶段骨骼肌circRNA的分析与鉴定》

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为确保测序结果的准确性和有效性，需要通过qRT-PCR验证基因表达水平。选择验证的RNA至少在一组对照组中表达差异显著，且与骨骼肌的生长发育相关。经过组间对比和筛选，最终分别选择circRNA和mi RNA各4个进行验证。根据转录本数据库设计转录物引物（表1），使用CFX-Connect TM实时系统（BioRad）上的SYBR green I master mix（Roche，Gm BH，Basel，Switzerland）进行实时PCR。试验结果用目的基因值减去内参基因值得到ΔCt，再以相对参照样品的ΔCt均值为对照组，用各组ΔCt值减去对照组得到ΔΔCt，以2-ΔΔCt平均值表达出各个基因的相对表达量，利用SPSS 22.0软件对所得表达量进行单因素方差分析(One-way ANOVA），结果分为差异显著（P≤0.05）和差异极显著（P≤0.01）。