《表1 荧光定量引物列表：草鱼3个6-磷酸葡萄糖酶催化亚基的基因表达分析及高糖饲料对其表达的影响》

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《草鱼3个6-磷酸葡萄糖酶催化亚基的基因表达分析及高糖饲料对其表达的影响》

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随机取同一养殖环境且大小均一的3尾草鱼，用麻醉剂MS222（20 mg/L）（Sigma，美国）麻醉，并在无菌条件下取草鱼的鳃、脂、脑、心脏、肝、肾、前肠、中肠、后肠和肌肉10个组织，用液氮快速冷冻，保存于–80℃冰箱备用。使用RNAiso Plus法提取上述组织的总RNA，并用HiScript II Q RT SuperMix for qPCR（诺唯赞，南京）反转录试剂盒进行体外反转录合成cDNA。利用Primer 6软件设计跨内含子定量引物（表1），并送生工生物工程股份有限公司（中国，上海）合成。以草鱼转录延伸因子（ef1α）为内参，用实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测草鱼3个g6pc基因的组织表达。RT-PCR反应体系:ChamQ SYBR qPCR Master Mix（诺唯赞，南京）10μL，10μmol的上游引物和下游引物各0.4μL，模板cDNA 1μL，用ddH2O将反应体系补足到20μL。反应程序为95℃，预变性5 min；95℃变性15 s，Tm值58℃退火15 s（不同引物Tm不同）（表1）；72℃延伸45 s，40个循环。最后，草鱼3个g6pc基因在各组织中的相对表达量用2–ΔΔCt的方法分析[27]。