《表1 荧光定量引物：玉米响应盐胁迫的差异表达基因分离》

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《玉米响应盐胁迫的差异表达基因分离》

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为验证TDFs的cDNA-AFLP表达谱，根据基因的功能注释和功能分类，选取与胁迫响应相关的2个差异基因进行qRT-PCR验证。用Premier 5.0软件进行引物设计，引物尽量使目的基因的大小控制在150～250 bp，以玉米Actin为内参，特异引物设计见表1。实时定量PCR（RT-PCR）采用两步法，步骤参考SYBRPremix Ex TaqTM（Takara）说明书进行。PCR总反应体系为20μL，上下游引物各0.4μL，cDNA模板2μL，SYBR Premix Ex TaqTM10μL，Rnase Free ddH2O 7.2μL。PCR反应条件为，95℃预变性3 min；95℃变性5 s，60℃退火30 s，72℃延伸30 s，共进行40个循环。每个反应均设有3次重复，采用2-ΔΔCt法分析各基因的相对表达量。