《表1 荧光定量PCR引物序列表》
荧光定量PCR检测各组小鼠结肠组织中炎性因子TNF-α、IL-6、IL-1β、一氧化氮合酶(Induced Nitric Oxide Synthase,iNOS)、环氧合酶(cyclooxygenase-2,COX-2)和SOD、GSH-Px、CAT等抗氧化酶的mRNA相对表达量。根据上海ExCell公司RNA Lyzol说明书提取各个肠段组织RNA,并测得所有样品浓度和质量,OD260/280在1.8~2.0,可用于下一步试验。然后按照美国Gene Copoeia公司cDNA逆转录试剂盒的步骤将RNA反转录为cDNA。最后进行荧光定量PCR,采用20μL反应体系:SYBR(日本TaKaRa)10μL,上、下游引物各1μL、cDNA模板2μL,ddH2O 6μL,在美国Bio-Rad荧光定量PCR仪中按照95℃预变性30 s,95℃变性5 s,60℃退火30 s,39个循环进行PCR反应,每次试验均设置18S作为内参,用2-ΔΔCt法计算炎性因子mRNA的相对表达量。所用引物均由上海生工生物技术公司合成(表1)。
图表编号 | XD0098519500 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2019.06.10 |
作者 | 张子琪、朱凌羽、刘惠麟、李若楠、郎伍营、吴旻、兰海楠、郑鑫 |
绘制单位 | 吉林农业大学动物科学技术学院、吉林农业大学动物科学技术学院、吉林农业大学动物科学技术学院、吉林农业大学动物科学技术学院、吉林农业大学动物科学技术学院、吉林农业大学动物科学技术学院、吉林农业大学动物科学技术学院、吉林农业大学动物科学技术学院 |
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