《表2 实时荧光定量PCR引物序列表》

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《早期停育胚胎的滋养层细胞相关基因与特征分析》

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为了验证测序结果的可靠性，选取了10个m RNAs （包括后续分析所得模块中的核心m RNA，VSIG4、C1QC、CD36和SPP1）和4个lnc RNA进行实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，q RT-PCR）验证。纳排标准与前期测序的样本一致，能有效保证实验结果的可靠性。根据Ensemble (http://asia.ensembl.org/index.html）提供的序列，使用在线引物设计网站Primer3Plus （http://www.primer3plus.com/cgi-bin/dev/primer3plus.cgi）设计引物，并通过BLAST（https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi?PROGRAM=blastn&PAGE＿TYPE=Blast Search&LINK＿LOC=blast hom e）进行引物特异性验证。以Triz ol法提取总RNA，使用逆转录试剂盒（大连Ta Ka Ra公司）反转录为c DNA。以此c DNA为模板进行实时荧光定量PCR（美国Thermo Fisher公司），引物序列见表2。以GAPDH作为内参基因，使用2–ΔΔCt法计算两组中差异表达m RNAs和lnc RNAs的相对表达量。