《表1 各引物序列表：水质中大肠杆菌荧光定量PCR检测方法的建立及应用》

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《水质中大肠杆菌荧光定量PCR检测方法的建立及应用》

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通过GenBank查找uida基因序列，通过BLAST比对筛选出更为保守的基因片段约为800bp，设计两对PCR引物（如表1所示），采用表1中的uida-F/uida-R引物，以大肠杆菌基因组为模板，对大肠杆菌uida保守基因片段进行常规PCR反应。反应体系共计50μL，ddH2O 37.5μL，基因组模板1μL，10×PCR buffer 5μL，2mM dNTP 4μL，Taq酶（5U/μL)0.5μL，上下游引物各1μL。扩增反应程序如下：94℃预变性3min，94℃1min，56℃30s，72℃1min，30个循环进行延伸；4℃保温10min。反应结束后，取5μLPCR产物进行1%琼脂糖凝胶电泳，再由割胶回收试剂盒割胶回收，-20℃保存。