《表1 各引物序列表:水质中大肠杆菌荧光定量PCR检测方法的建立及应用》

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《表1 各引物序列表:水质中大肠杆菌荧光定量PCR检测方法的建立及应用》
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水质中大肠杆菌荧光定量PCR检测方法的建立及应用中,通过GenBank查找uida基因序列,通过BLAST比对筛选出更为保守的基因片段约为800bp,设计两对PCR引物(如表1所示),采用表1中的uida-F/uida-R引物,以大肠杆菌基因组为模板,对大肠杆菌uida保守基因片段进行常规PCR反应。反应体系共计50μL,ddH2O 37.5μL,基因组模板1μL,10×PCR buffer 5μL,2mM dNTP 4μL,Taq酶(5U/μL)0.5μL,上下游引物各1μL。扩增反应程序如下:94℃预变性3min,94℃1min,56℃30s,72℃1min,30个循环进行延伸;4℃保温10min。反应结束后,取5μLPCR产物进行1%琼脂糖凝胶电泳,再由割胶回收试剂盒割胶回收,-20℃保存。

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