《表5 引物序列(5)：利用基因工程改造的大肠杆菌合成蒎烯》

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《利用基因工程改造的大肠杆菌合成蒎烯》

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下划线序列为酶切位点

以酵母基因组为模板，设计引物（表5）分别克隆目的基因ERG12、ERG8、ERG19和IDI，引物设计时分别在基因两端引入相应的酶切位点（ERG12和IDI酶切位点为NdeⅠ/XhoⅠ，ERG8和ERG19为Bam HⅠ/XhoⅠ）。PCR条件:98℃30 s；98℃20s，61℃（ERG12）/59℃（ERG18）/59℃（ERG19）/55℃（IDI）20 s，72℃50 s，30个循环；72℃2 min。目的产物与pET-30a载体分别酶切连接后，转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，酶切测序鉴定正确的质粒分别命名pET30a-ERG12、pET30a-ERG8、pET30a-ERG19、pET30a-IDI。