《表1 引物及探针合成序列（3′-5′）》

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《多重感染及病毒载量对儿童呼吸道感染严重程度的影响》

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注：RSV：呼吸道合胞病毒；PIV：副流感病毒；Flu：流感病毒；HRV：人鼻病毒

根据以往文献对于儿童呼吸道感染常见的病原体[4]，结合本研究实际情况，主要检测RNA病毒包括呼吸道合胞病毒（Respiratory syncytial virus，RSV）、副流感病毒（Parainfluenza virus，HPIV)1-3型、流感病毒A和B(Flu virus，Flu）、人鼻病毒（Human rhinovirus，HRV）。首先使用拭子取患儿咽部分泌物样本后置于无菌管中-80℃保存，而后使用赛默飞世尔公司提供的MagMAX Pathogen RNA Kit试剂盒（批号：1412022）提取相关病毒的RNA，使用宝日医生物技术（北京）有限公司提供的PrimeScriptⅡ1st Strand cDNA Synthesis Kit转录试剂盒（批号：1326210）进行逆转录并合成cDNA，而后进行荧光定量PCR，主要使用探针及Ex Taq酶（宝日医生物技术有限公司提供，批号：1457001）引物及探针合成序列参照NCIB GeneBank中对于目标病毒的描述，见表1。赛默飞世尔公司提供的One step Rt-PCR Kit试剂（批号：4415328）行荧光定量一步法检测病毒，每个循环的第二步结束时采集荧光，由仪器自带软件计算出Ct值并给出定量结果，将病毒载量≥1×103copies/mL视为阳性。