《表1 双探针、标记引物和检测引物序列及特性》

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《基于双探针杂交的AIV、NDV和FAV-4三重环介导PCR鉴别检测方法的建立及应用》

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注:a.标记引物5′末端磷酸化修饰；标记引物中划线部分为探针。b.H9N2AIV血凝素HA基因（JF715045.1），NDV融合蛋白F基因（JX840454.1）和FAV-4六邻体Hexon基因（KU877432.1）。Note:a.5′ends of labeling primers were phosphorylated；Lined sequences of labeling primers wer

以GenBank收录的H9N2亚型AIV血凝素HA基因（JF715045.1）、NDV融合蛋白F基因（JX840454.1）和FAV-4的六邻体Hexon基因（KU877432.1）为参考，采用DNAStar MegAlign软件分析基因序列的保守性及分子进化特征，分别选取一段长度为30~40bp的保守区作为杂交探针，并进行在线BLASTN分析。将特异性杂交探针序列均分为左（L Probe）、右（R Probe）双探针，采用常规PCR技术将双探针分别标记拟南芥TOC1基因片段两端，即可获得双探针标记的报告基因，试验中涉及的双探针、标记引物和检测引物均利用Primer Premier 6.0软件设计，由生工生物（上海）工程股份有限公司合成，序列见表1。