《表1 检测病原体所用引物和探针序列》

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《应用TaqMan探针实时荧光定量PCR法调查北京市部分城郊区鼠传病原体流行状况》

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选用文献中报道的引物和探针检测莫氏立克次体、嗜吞噬细胞无形体、恙虫病东方体、土拉菌、巴尔通体和钩体6种病原体（表1），探针及引物[11-16]由北京奥科鼎盛生物科技有限公司合成。反应体系为20μl，10μl用于qPCR反应的Taq DNA聚合酶和dNTP混合液HR qPCR Master Mix，探针0.4μl（终浓度200 nmol/L），正、反向引物各0.8μl（终浓度为400 nmol/L），去离子水5μl，DNA模板3μl。应用伯乐（BioRad，美国）CFX96荧光定量PCR仪进行扩增，反应参数:第1步，95℃5 min，1个循环；第2步，95℃15 s，60℃45 s，40个循环。反应设阳性及空白对照，阳性对照模板为各病原体的靶标序列质粒标准品，由北京擎科新业生物技术有限公司合成。