《表1 检测用核桃、花生和大豆引物和探针序列》

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《2种用于检测市售核桃露(乳)饮品中花生、大豆成分方法的比较分析》

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实时荧光PCR检测方法参考国家食品药品监督管理总局公告2017年第75号《植物蛋白饮料中植物源性成分鉴定》[8]中核桃、花生和大豆成分的定性检测方法，引物和探针由Invitrogen公司合成并经高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC）方法纯化（表1）。实时荧光PCR扩增总体积为25μL，反应体系如下:10×Ex Taq Buffer （含Mg2+）2.5μL，d NTPs Mixture （2.5 mmol/L）1μL，上下游引物（10μmol/L）各1μL，探针（10μmol/L）1μL，Ex Taq酶（5 U/μL）0.15μL，模板DNA 2μL，用灭菌去离子水补足体积至25μL。扩增反应条件如下:95℃5 min；95℃30 s，60℃30 s，72℃30 s，40个循环；在每个循环的60℃30 s后收集FAM通道荧光信号。实验结束后，根据每个反应管在实验过程中荧光信号强度变化，使用Bio-Rad CFX Manager软件计算Ct值。实验以无菌去离子水作为阴性对照，以探针对应的植物DNA为阳性对照，其中大豆和花生阳性对照经或不经121℃高压20 min处理。每个样品重复测定3次。