《表4 引物序列(4)：利用基因工程改造的大肠杆菌合成蒎烯》

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《利用基因工程改造的大肠杆菌合成蒎烯》

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下划线序列为酶切位点

提取酿酒酵母基因组作为模板，分别PCR扩增目的基因ERG12、ERG8、ERG19和IDI，选用NE-Builder HiFi DNA Assembly Cloning Kit，根据多顺反子模型原理构建基因四串联共表达载体。利用NEB在线工具（NEBuilder Assembly Tool）设计引物（表4）分别扩增目的片段[98℃30 s；98℃20 s，57℃（ERG12）/57℃（ERG18）/55℃（ERG19）/54.5℃（IDI）/56℃（p ET-24a)20 s，72℃45 s（ERG12、ERG8、ERG19、IDI）/180 s(p ET-24a），30个循环；72℃2 min]。