《表1 叶绿素合成相关基因的引物序列》

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《彩叶香樟叶片色素含量及其合成相关基因表达的变化》

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CHLH:Mg-螯合酶H亚基；CHLI:Mg-螯合酶I亚基；CHLD:Mg-螯合酶D亚基；HEMA：谷氨酰-t RNA还原酶；GSA：谷氨酸酯-1-半醛2，1氨基变位酶；HEMC：胆色素原脱氨酶；HEMD：尿卟啉原III合成酶；HEME：尿卟啉原Ⅲ脱羧酶；HEMF：粪卟啉原Ⅲ氧化酶；HEMG：原卟啉原氧化酶；CHLM:Mg-原卟啉

在叶片颜色相关测定进行的同时，采集'涌金'与野生香樟树冠中上部当年生叶片各12片，经液氮速冻后于-80℃冰箱保存备用。利用十六烷基三甲基溴化铵（hexadecyl trimethyl ammonium bromide，CTAB）法提取叶片总RNA，使用NanoDrop微量分光光度计（Thermo公司，美国）测定RNA的纯度和浓度，经1%的琼脂糖凝胶电泳检测其完整性。参照PrimeScript?RT reagent Kit（TaKaRa公司，大连）反转录试剂盒的说明书合成cDNA。根据叶绿素合成酶相关基因的注释（王平荣等，2009），结合课题组已有香樟转录组数据库，查找库中与叶绿素合成酶相关的基因序列，并利用Oligo7.0设计qRT-PCR的引物。所设计的引物由南京金斯瑞生物科技有限公司合成，引物序列见表1。使用SYBR?Premix Ex TaqTMTliRNAseH Plus（TaKaRa公司，大连）和PrimeScript?Reagent Kit（TaKaRa公司，大连）的试剂与荧光定量PCR仪（Bio-Rad公司，美国）进行q RT-PCR的检测，每个样品3个重复。qRT-PCR反应总体系为10μL:SYBR Premix Taq（1×）5μL，上、下游引物（0.2μmol/L）各0.2μL，cDNA（100 ng/μL）1μL，ddH2O 3.6μL，扩增程序为95℃30 s，95℃5 s，61℃30 s，40个循环，65℃5 s，95℃5 s。以CcACTIN1作内参基因，以4月10日的野生香樟的作为参照组，采用2-ΔΔCt法分析qRT-PCR结果并计算'涌金'与野生香樟表达差异，相关计算在CFX96Manager?V 1.6上完成。