《表1 引物序列(1)：利用基因工程改造的大肠杆菌合成蒎烯》

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《利用基因工程改造的大肠杆菌合成蒎烯》

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下划线序列为酶切位点

共表达GPPS和PS基因分别由2个启动子控制并独立表达成2个蛋白，以含目的基因的质粒为模板设计引物（表1），扩增目的基因片段，并在GPPS基因两端引入Bam HⅠ和HindⅢ酶切位点、PS基因两端引入NdeⅠ和BglⅡ酶切位点，进行PCR扩增[98℃30 s；98℃20 s，58℃（GPPS）/59℃（PS）20 s，72℃40 s（GPPS）/60 s（PS），30个循环；72℃2 min]，将扩增的GPPS和PS基因分别酶切连入不同的多克隆位点，构建pETDuet1-GPPS-PS，鉴定正确的质粒交由华大公司测序。