《表2 5种致泻大肠埃希氏毒力基因的引物和探针序列》

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《5种致泻大肠埃希氏菌实时荧光定量PCR快速检测技术》

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F为上游引物，R为下游引物，T为探针，FAM、ROX、JOE和CY5为荧光基团，BHQ1、BHQ2和BHQ3为淬灭基团。

肠道致病性大肠埃希氏菌（EPEC）的毒力基因为escV/eae、bfpB，产志贺毒素大肠杆菌（STEC）和肠道出血性大肠埃希氏菌（EHEC）的毒力基因为escV/eae、stx1、stx2A，产肠毒素大肠埃希氏菌（ETEC）的毒力基因为lt、stIa、stIb，肠道侵袭性大肠埃希氏菌（EIEC）的毒力基因为invE/ipaH，肠道聚集性大肠埃希氏菌（EAEC）的毒力基因为astA、aggR、pic（见表1）；首先在NCBI中查找出escV、bfpB、stx1、stx2A、lt、stIa、stIb、invE、astA、aggR和pic的多个genebank序列号的基因序列，通过Genbank软件和BLAST软件进行序列同源性分析，确定各毒力基因的保守区域，采用Primer Premier 5.0和DNAstar软件在各自保守区域中设计引物与探针（见表2），将设计好的引物和探针委托生工生物工程（上海）股份有限公司进行人工合成。