《表1 大肠埃希菌毒力相关基因fim、usp、hlyA的引物序列》

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《双J管相关泌尿系感染临床特点分析》

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按随机数字表法选取A、B、C3组尿液（n=8）和导管（肾盂段，n=6）细菌培养为大肠埃希菌阳性标本，选择未使用导管（n=6）和健康成年男性（n=8）尿液为对照组。RT‐PCR检测细菌毒力相关基因fim、usp、hlyA的表达。无菌双J管用于对照组实验。RT‐PCR步骤：总RNA的提取参照试剂盒说明书操作，酶标仪用于测定核酸的纯度，逆转录试剂盒将RNA逆转为cDNA后，PCR试剂盒配置为20μL体系：10μL PCR Mix，2μL cDNA，上下引物各1μL，6μL无RNase水。扩增程序：2 min，94℃预变性，94℃变性30 s，fim、usp、hlyA和β‐actin退火分别为58、59、56和55℃，30 s，72℃延伸30 s，终延伸72℃5 min。反应结束后，取fim、usp、hlyA和β‐actin扩增产物各5μL分别与6×Loading Buffer 1μL混合，2%琼脂糖凝胶电泳鉴定，使用Image J软件对电泳图片进行灰度值统计分析。扩增的引物见表1。