《表1 大肠埃希菌检测所用引物》

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《鸭致病性大肠埃希菌的分离鉴定与毒力基因检测及菌蜕制备》

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无菌采集病死鸭的心血、肝脏等病料，在麦康凯琼脂培养基上划线接种，将琼脂平板倒置于37℃恒温培养箱内培养过夜，次日取出进行菌落形态观察。挑取麦康凯平板上的典型菌落进行革兰染色和镜检，并将镜检结果为革兰阴性的细菌转接于葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、甘露醇、吲哚、MR、枸橼酸盐、VP、硫化氢等细菌生化微量鉴定管及三糖铁琼脂培养基，进行生化鉴定。参考已报道的针对大肠埃希菌16s RNA基因保守区的引物，对所分离的临床菌株进行PCR检测[14–15]，引物序列见表1。PCR反应体系：2×PCR Master Mix 12.5μL，上下游引物各20 pmol，模板DNA 2μL，加双蒸水至总体积25μL。PCR反应条件：95℃预变性4 min；95℃变性30 s，不同基因的相应退火温度下（表1）反应30 s，72℃延伸30 s，30个循环；72℃延伸10 min。