《表1 引物信息：从新生儿标本中分离3株ST1642型产NDM-5型碳青霉烯酶大肠埃希菌》

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《从新生儿标本中分离3株ST1642型产NDM-5型碳青霉烯酶大肠埃希菌》

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煮沸裂解法提取3株CR-ECO菌株的DNA模板。PCR技术扩增碳青霉烯酶基因（blaKPC、blaIMP、blaVIM和blaNDM）及超广谱β-内酰胺酶基因（blaCTX-M、blaSHV、blaTEM）、头孢菌素酶基因（blaFOX、blaDHA、blaCIT）、喹诺酮类耐药相关基因（qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrS）。用Primer 6.0引物设计软件，并参考pNDM 10505（NC＿019069.1）和pNDM＿MGR194（NC＿022740.1）设计blaNDM基因引物序列，参考pEK499（NC＿013122.1）和p HK08（NC＿019072.1）设计blaCTX-M基因引物序列，其余引物来自文献[5-13]，引物信息见表1。PCR反应体系为25μL:PCR mixture 12.5μL，ddH2O 8.5μL，上、下游引物（10μmol/L）各1.0μL，DNA模板2.0μL。PCR反应条件:94℃3 min；94℃30 s，退火（温度见表1）30 s，72℃1 min，30个循环；72℃8 min。PCR扩增产物经10 g/L琼脂糖凝胶电泳观察结果，阳性扩增产物送上海生工生物公司测序，测序结果在NCBI经BLAST比对分析。