《表1 3种致泻大肠埃希氏菌目标基因条带与型别对照表》

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《3种致泻大肠埃希氏菌多重PCR检测试剂盒的研制与效用评价》

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注：+表示有；-表示无；*表示97%以上大肠埃希氏菌为uid A阳性。

根据GB 4789.6-2016[10]中给出的12个目标基因在6种DEC中的分布，可通过检测uid A、bfp B、esc V、stx2和stx1 5个目标基因有无（见表1和图1），即可判断被测试菌株是否为EPEC、STEC和EHEC，选取以上5个目标基因对应的PCR引物，见表2。设计目标基因uid A和bfp B为检测体系EP，目标基因esc V、stx2和stx1为检测体系ST，经单因素控制变量法，以EPEC(CICC24189）和STEC(CICC10670）各自精提取DNA作为反应模板，分别测试该PCR检测体系中涉及到的不同因素（包括不同目标基因引物浓度配比、反应循环数以及退火温度）具体数据值梯度，如设置目标基因uid A反应浓度为0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6μmol/L，并综合分析以上所有测试结果，进而获取最优的检测体系EP和检测体系ST。