《表1 HbNIN7重组蛋白酶的底物Km值和最大反应速率 (Vmax)》

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《橡胶树中碱性转化酶基因HbNIN7的克隆与表达分析》

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在37℃恒温水浴锅反应30 min，测定了HbNIN7重组蛋白在不同pH值（3.0，3.5，4.0，4.，5.0，5.5，6.0，6.5，7.0，7.2，7.4，7.5，7.6，7.8，8.0，8.5，9.0，9.5，10）缓冲环境下的酶活性，以确定最适pH值。结果表明（图7），pET-HbNIN7重组蛋白有较强的转化酶活性，但活性受反应体系的p H影响大，pH值5.5以下和pH值9.0以上活性都很低，p H值6.0到pH值9.0之间，每升高或降低0.5活性变化剧烈，最适酶活pH值是7.2，具有典型的中碱性转化酶特性。在最适pH值缓冲环境下，测定5℃～75℃之间15个温度梯度的酶活性，结果表明（图8）:HbNIN7酶活受反应温度影响也较大，最适温度是45℃，在40℃～55℃区间内维持相对稳定，低于40℃或超过55℃，酶活性显著下降。设计蔗糖浓度梯度:1mmol/L，1.5mmol/L，2mmol/L，2.5mmol/L，5 mmol/L，10 mmol/L，20 mmol/L，30 mmol/L，40 mmol/L，50 mmol/L，100 mmol/L，200 mmol/L，以测定HbNIN7以蔗糖为底物酶促反应的米氏常数（Km）和最大反应速度（Vmax），结果表明（图9；表1）:HbNIN7以蔗糖为底物酶促反应的米氏常数（Km）是25.04 mmol/L，最大反应速度（Vmax）为32.69mmolhexose·mg-1protein·h-1，说明HbNIN7蛋白对蔗糖亲和力较弱。