《表1 MALDI-TOF质谱检测到的肽段分析》

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《Thermotoga sp.RQ7内切纤维素酶TsCel12A蛋白的酶学性质和晶体学研究》

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TsCel12A融合蛋白在E.coli BL21 (DE3）菌株中表达，His-TsCel12A共有277个氨基酸残基，理论大小约为34kDa．在重复纯化的过程中，目的蛋白位置附近存在十分接近且难以分离的条带（图1 (a），见第492页）．因其酶学性质的测定表明此酶在80℃以上的高温环境中不发生变性，故对破碎后的菌体取得的上清增加80℃处理30min后15 000r/min离心15min的操作以提高纯度．将热处理后二次离心的上清进行镍柱亲和层析，纯化得到了位置均一的洗脱样品（图1 (b），见第492页）．将样品浓缩至5mL，经凝胶过滤层析柱洗脱得到了单一蛋白峰（图1 (c），见第492页），进行SDS-PAGE检验，目的蛋白纯度可达95%以上，位置较理论值偏小，原因可能为热处理过程使其构型更加紧密．对照凝胶过滤层析中标准品的出峰体积（图1 (d），见第492页），判断Ts Cel12A蛋白在溶液中以单体形式存在．进行MALDI-TOF质谱分析，检测到了第38～60位、第191～221位、第265～277位氨基酸肽段的信号（表1），且期望值0.000 17<0.01，进一步验证了所获蛋白为目的蛋白．Bradford法测定蛋白浓度约为15mg/mL.