《表1 MC5Rs基因克隆和突变型构建引物》

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《鸡、鸭、鹅MC5R真核表达载体及突变型的构建及信号通路初探》

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从GenBank中查询鸡、鸭、鹅MC5Rs编码区序列（gMC5R:KF670718；apMC5R:XM＿005018192；acdMC5R:XM＿013179517）。根据ClonExpressⅡOne Step Cloning Kit说明书分别设计引物扩增gMC5R、apMC5R、acdMC5R编码区序列，并且在引物两端加入质粒同源臂（见表1小写字母），同源臂中含酶切位点上游:HindⅢ，下游:XhoⅠ（见表1下划线），5′端加入Kozark序列:GCCACC。因GenBank中为预测序列，且有X1、X2、X3等不同可能基因型，实际基因扩增中将所有基因型引物都进行PCR扩增，最终鸡、鸭、鹅各有一个基因型扩增成功，表1列出的为扩增成功的引物序列。每个PCR反应进行3次独立试验，均进行测序，以排除Taq酶错配情况，确保最终扩增序列的正确性。